Conjuga��o Bacteriana Show Introdu��o A conjuga��o bacteriana, descoberta por Ledeberg e Tatum (1946), � o processo sexual de transfer�ncia de genes de uma bact�ria doadora para uma receptora. Para que uma linhagem bacteriana seja doadora ela deve conter um plasm�dio conjugativo (elemento extracromoss�mico). O processo de conjuga��o foi descoberto em Escherichia coli K12 e o elemento respons�vel foi chamado de fator F (tamb�m chamado de plasm�dio F). Este plasm�dio pode estar ou n�o integrado no cromossomo da bact�ria hospedeira. Quando integrado, a bact�ria � chamada de HFr (alta freq��ncia de recombina��o) devido � mobiliza��o de genes cromoss�micos no processo de conjuga��o desencadeado por produtos g�nicos do plasm�dio. A c�lula F+, durante o contato com um c�lula F-, transfere para esta �ltima uma c�pia do plasm�dio F, tornando-a F+. A linhagem HFr, onde o fator F encontra-se integrado no cromossomo, transfere essencialmente marcadores localizados no cromossomo, sendo que apenas muito raramente a totalidade do fator F � transferida (conjuntamente com todo o cromossomo da doadora). Portanto, nesse caso a c�lula receptora permanece F- ap�s a conjuga��o. Ap�s a descoberta do fator F, outros plasm�dios conjugativos foram descritos, como os plasm�dios ou fatores R. Esses plasm�dios t�m esse nome gen�rico por conterem marcadores de resist�ncia a drogas antibacterianas e em geral n�o se integram no cromossomo bacteriano. Neste experimento ser� usada a linhagem de E. coli portadora de plasm�dio R. Para uma revis�o sobre o assunto, consulte o DAVIS e col (1979), CHARTONE-SOUZA (1979), AZEVEDO (1977), HERSKOWITZ (1971) ou LEVINE (1977). Material: - Escherichia coli BH100 (Lac+, resistente a ampicilina, canamicina, merc�rio, cloranfenicol e tetraciclina). - Escherichia coli K12 (Lac�-, resistente � estreptomicina). - Solu��es estoques de estreptomicina (300mg/ml), de tetraciclina (20�g/ml). - Agar BEM. - Caldo nutriente. - Tubos esterilizados. - Placas de petri esterilizadas. - Pipetas de 1 a 5 ml esterilizadas. - Al�as de n�quel cromo. - Espalhador de vidro (al�a de Drigalsky). - �lcool. M�todo: 1) Inocular em caldo nutriente c�lulas de E.coli BH100 e E.coli K12 (culturas separadas). Incubar a 37�C, durante 18 a 24 horas. 2) Colocar 0,2ml da cultura de E.coli BH 100 (doadora) e 0,8ml da cultura de E.coli K12 (receptora) em 4ml de caldo nutriente. Incubar a cultura mista a 37�C, sem agita��o durante 2 a 4 horas. 3) Semear 0,1ml da cultura mista em uma placa de BEM contendo estreptomicina (300�g/ml) e tetraciclina (20�g/ml). Semear com al�a de n�quel cromo cada uma das culturas separadas nas placas controle: EMB + estreptomicina, EMB + tetraciclina, EMB + estreptomicina + tetraciclina. Incubar a 37�C, por 24 horas. 4) Analisar os resultados. Resultados, Discuss�o e Conclus�o a) Qual o n�mero de transcojugantes total resultantes do experimento de conjuga��o? b) Explique a finalidade de cada uma das placas controle. Compare os resultados obtidos com o que seria esperado. c) Se voc� transferisse alguns transconjugantes para uma placa contendo EMB + tetraciclina, o que voc� acha que iria acontecer? d) Que conclus�es voc� pode tirar deste experimento? Bibliografia AZEVEDO, JL. 1997. T�picos de Gen�tica microbiana e molecular. Vol II. Gen�tica de Procariotos. Piracicaba, SP. 207pp. CHARTONE-SOUZA,E.1979. Quimotaxia entre linhagens doadoras e receptoras de plasm�dio R em Escherichia coli. Tese de Doutoramento, ESALQ/USP � Piracicaba, SP. 112pp. DAVIS,DG e DULBECCO,R. 1979. Microbiologia. Vol.1, 2� ed. Editora Harper e Row do Brasil, 421pp. HERKOWITZ, IH. 1971. Princ�pios B�sicos de Gen�tica Molecular. Companhia Editora Nacional. 340pp. LEDERBERG, J e TATUM, EL. 1946. Gene recombination in Escherichia coli. Journal of Bacteriology, 112: 315-326. LEVINE, L. 1977. Biologia do Gene. Ed. Edgard Blucher. 405pp. Como ocorre a transferência de informação genética entre as bactérias?A transformação bacteriana ocorre pela absorção de fragmentos de DNA presentes no ambiente, originados de outras bactérias mortas e decompostas. Essa molécula ou fragmento será incorporado ao DNA da bactéria através da permuta de bases entre o DNA original e o fragmento absorvido.
O que é responsável pela transferência de material genético plasmídeo de uma bactéria para outra?Fagos detém a capacidade de transferir genes de uma bactéria para outra, segundo um processo denominado transdução.
Como é a estrutura do material genético das bactérias?As bactérias são seres procariontes, ou seja, não possuem núcleo definido, e seu material genético está concentrado em uma região que não é envolta por membrana. Essa região é denominada nucleoide.
Quais os mecanismos para transferência de material genético?Hoje, sabe-se de 4 mecanismos principais que podem atuar na transferência horizontal de genes. São eles: Conjugação, Transdução, Transformação é também por meio dos agentes de transferência.
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Qual a estrutura responsável pela transferência de material genético entre bactérias?
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